外泌體差速超速離心提純方法:
DUC 是最早和最常報道的外泌體分離策略。操作步驟如下。該方法過程簡單,不引入其他標記,適用于大劑量樣品分析。然而,鑒于細胞外液具有高度異質(zhì)性,DUC 可導(dǎo)致非理想的外泌體聚集; 因此,它可能不是一種合適的外泌體純化方法,因為大小相似的不同囊泡和蛋白質(zhì)聚集體可以在 100,000 × g 下共同形成。因此,應(yīng)進一步純化使用該方法制備的外泌體。此外,離心力會導(dǎo)致外泌體結(jié)構(gòu)的破壞,進而影響下游實驗,特別是外泌體的功能分析。
外泌體凍干工藝開發(fā)與處方設(shè)計:
1. 核心目標: 保持外泌體完整性(膜結(jié)構(gòu)、RNA/蛋白質(zhì)活性);提高凍干后復(fù)溶性及長期穩(wěn)定性。
2. 關(guān)鍵步驟與實驗設(shè)計保護劑篩選:常用海藻糖、蔗糖、甘露醇等非還原性糖類,通過氫鍵穩(wěn)定脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu),減少冰晶損傷。 實驗方案:對比不同保護劑(如海藻糖濃度梯度)對外泌體粒徑、Zeta電位、蛋白質(zhì)含量的影響。
凍干曲線優(yōu)化: 分析指標:水分殘留量(<3%)、復(fù)溶時間(<1分鐘)、形態(tài)(納米流式檢測,需要由用戶完成)。
外泌體凍干可提供如下服務(wù):
1. 提供外泌體凍干配方開發(fā)。
2. 提供外泌體凍干工藝曲線開發(fā)。
3. 提供外泌體凍干生產(chǎn)放大工藝開發(fā)。
4. 提供外泌體上下游凍干設(shè)備開發(fā)。